Luke Macfarlane est un acteur et musicien canadien né le 19 janvier 1980 à London, Ontario, connu surtout pour le rôle de Scotty Wandell dans la série Brothers & Sisters.
Son père, Thomas (mort en 2007), était le directeur du Student Health Services à l'Université d'Ontario, et sa mère, Penny infirmière à l'hôpital de London. Luke a fait ses études secondaires à la London Secondary School avec sa sœur jumelle Ruth ainsi que sa sœur ainée Rebecca. Il poursuit ensuite des études à la Pearson school for the Arts, puis intègre ensuite la prestigieuse école d'art dramatique de Juilliard School à New York, ou il a joué dans des productions telles que Roméo & Juliette, Richard III, The school of night, Les raisins de la colère, Blue window et As you like. Il est en sort diplômé lors de la promotion 2003.
À la télévision, il est surtout connu pour son rôle de Scotty Wandell dans la série à succès de la chaine américaine ABC Brothers & Sisters. Il y joue le mari de Kevin (interprété par Matthew Rhys). Précédemment, il a joué l'un des personnages principaux de la série Over There sur la chaine FX Network en 2005, dans le rôle de Frank "Dim" Dumphy. Il a également le rôle de Stuart De Barge dans la mini-série de Robert Altman Tanner on Tanner. Il fut le dernier acteur à rejoindre le casting pour tourner le pilote de la série Supreme Courtship, pour jouer le rôle du conservateur Allen Moore. Cependant, cette série n'a jamais été diffusée par la chaine FOX, qui ne l'a pas retenue pour la saison 2007-2008. Il intègre ensuite le casting de Iron Road,une nouvelle mini-série en deux parties dans l'un des rôles principaux. Celle-ci fut tournée en Chine et en Colombie britannique en sept semaines (entre avril et mi-juin 2007). Elle a été diffusée dans quelques cinémas au Canada et sur la chaine américaine CBC aux États-Unis. Il a également fait partie de la distribution d'une comédie musicale de Howard Ashman Dreamstuff. Ce spectacle a été représenté à Los Angeles au Hayworth Theatre. À ses côtés, on retrouvait Eden Espinosa, Vicki Lewis, Fred Willard et David Blue.Il a également joué dans la célèbre série Night Shift en interprétant le rôle d'un militaire très courageux et le petit ami du Dr Drew Alister ((joué par l'acteur Brendan FEHR ).